fa خالص‌سازی ترکیبات فراکشن ایمونومدولاتور سیر با استفاده از HPLC فارماكوگنوزی و فارماسيوتيكس Pharmacognosy & Pharmaceutics پژوهشی Research <div style="text-align: justify;"><strong>مقدمه:</strong> خواص دارویی گوناگونی برای سیر و ترکیبات جداشده از آن گزارش شده است. مطالعات ما و سایرین نشان‌دهنده تاثیر سیر بر پاسخ‌های سیستم ایمنی است. در مطالعات قبلی نشان داده شد که خواص ایمونومدولاتوری سیر مربوط به ماده موثره‌ای است که در فراکشن R10 جدا شده است. <strong>هدف:</strong> در این تحقیق به هدف خالص‌سازی ترکیبات فراکشن ایمونومدولاتور مورد نظر از تخلیص به روشHPLC استفاده شده است. <strong>روش بررسی:</strong> عصاره خام آبی سیر همدان تهیه شد. به منظور جداسازی پروتئین‌های بین10 الی 50 کیلو دالتون از اولترافیلترسیون استفاده شد. اجزای فراکشن R10 جمع‌آوری شده به کمک کروماتوگرافی فاز معکوس HPLC روی ستون سمی- پرپاراتیو (cm 25 &times; 1) 10TPV 208 Vydac که یک ستون فاز معکوس C8 است، از یکدیگر جداسازی شدند. برای تخمین اندازه پروتئین‌های جدا شده با RP-HPLC از روش تریسین SDS-PAGE استفاده شد. برای رنگ‌آمیزی از محلول کوماسی بلو R250 و برای نمونه‌های کم که با رنگ‌آمیزی با کوماسی بلو مشخص نمی‌شوند، از رنگ‌آمیزی نیترات نقره استفاده شد. <strong>نتایج:</strong> با استفاده از ستون HPLC فاز معکوس C8 در شیب 25/0 درصد (دقیقه /حلال B) و سرعت 1 میلی‌لیتر بر دقیقه در مدت 60 دقیقه، تعداد 6 فراکشن عمده با نام‌های 1- الی 6 جمع‌آوری شدند. از این میان فراکشن‌های 0 و 1 و 3 باندهایی را در محدوده 12 کیلو دالتون نشان دادند و برای بررسی‌های بعدی نگهداری شدند. <strong>نتیجه‌گیری:</strong> با کمک سیستم اولترفیلتراسیون می‌توان به سرعت به ترکیبات پروتئینی با وزن بین 10 الی 15 کیلو دالتون دست یافت. با استفاده از کروماتوگرافی فاز معکوس C8 اجزای این فراکشن به راحتی از هم جدا می‌شوند. سه فراکشن در محدوده وزن مولکولی 12KD به دست می‌آیند. بررسی‌های بیشتر جهت ارزیابی خواص ایمونومدولاتوری ترکیبات جداشده با استفاده از آزمون‌های بیولوژیک ضروری است.</div> <div style="text-align: justify;"><strong>Background:</strong> It has been reported that garlic extract and its components show medicinal effects including immunomodulatory activities. We have isolated the immunomodulatory fraction (R10) previously. <strong>Objective:</strong> In this study we have proposed to purify the components of R10 using HPLC. <strong>Methods:</strong> Crude garlic extract purchased from Hamadan, Iran. R10 fraction including 10-50 KD molecules have been isolated using ultrafiltration. Further purification has been made using Vaydac 208Tpv10, a semi-preparative HPLC reversphase choromatography column. Tricine SDS-PAGE has been used to determine molecular weight of the samples. <strong>Results:</strong> 6 major peakes were obtained from HPLC of R10 at gradient of 0.25 % of buffer B/min through 60 minute. The molecular weight of 3 peaks (samples 0, 1 and 3) was 12 KD with tricine-SDSPAGE. <strong>Conclusion: </strong>Using C8 HPLC reversphase choromatography seems to be appropriate tool for purification of R10 components and the purified components at peak 0, 1 and 3 seems to be isotypic molecules.</div> سیر, فراکشن ایمونومدولاتور, تخلیص, HPLC Garlic, Immunomodulator fraction, HPLC, Purification 100 106 http://jmp.ir/browse.php?a_code=A-10-261-1&slc_lang=fa&sid=1 T Ghazanfari طوبی غضنفری Amiri_h_lu@yahoo.com 100319475328460038448 100319475328460038448 Yes Herbal Medicine Research Center, Shahed University, Tehran, Iran دانشیار، گروه ایمونولوژی، مرکز تحقیقات گیاهان دارویی، گروه تحقیقاتی تنظیم پاسخ‌های ایمنی، دانشکده پزشکی، دانشگاه شاهد R Yaraee رویا یارایی 100319475328460038449 100319475328460038449 No Department of Immunology, School of Medicine, Shahed University, Tehran, Iran دانشیار، گروه ایمونولوژی، دانشکده پزشکی، دانشگاه شاهد A Asoode احمد آسوده 100319475328460038450 100319475328460038450 No Department of Chemistry, School of Basic Sciences, Mashhad University, Tehran, Iran استادیار، گروه شیمی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه مشهد T Rajabian طیبه رجبیان 100319475328460038451 100319475328460038451 No Department of Biology, School of Basic Sciences, Shahed University, Tehran, Iran استادیار، گروه زیست‌شناسی، دانشگده علوم پایه، دانشگاه شاهد M Kardar مژگان کاردر 100319475328460038452 100319475328460038452 No Herbal Medicine Research Center, Shahed University, Tehran, Iran پژوهشگر، گروه تحقیقاتی ایمونولوژی، دانشکده پزشکی، دانشگاه شاهد ZM Hassan زهیر محمد حسن 100319475328460038453 100319475328460038453 No Department of Immunology, School of Medical Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran استاد، گروه ایمونولوژی، دانشکده پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس H Naderi-Manesh حسین نادری‌منش 100319475328460038454 100319475328460038454 No Department of Biochemistry, School of Basic Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran دانشیار، گروه بیوشیمی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه تربیت مدرس V Soofian سفیه صوفیان 100319475328460038455 100319475328460038455 No Department of Biochemistry, School of Basic Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran دانشجوی دکترای، گروه بیوشیمی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه تربیت مدرس D Jamali داود جمالی 100319475328460038456 100319475328460038456 No Department of Immunology, School of Medicine, Shahed University, Tehran, Iran کارشناس، گروه ایمونولوژی، دانشکده پزشکی، دانشگاه شاهد